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轉(zhuǎn)染是采用除病毒感染外的其他方法將核酸(DNA或RNA)人工導(dǎo)入細(xì)胞的過程。采用各種化學(xué)、生物學(xué)或物理方法導(dǎo)入外源性核酸會(huì)改變細(xì)胞的特性,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞基因功能和蛋白質(zhì)表達(dá)研究。轉(zhuǎn)染后,導(dǎo)入的核酸可以瞬時(shí)性地存在于細(xì)胞內(nèi),只表達(dá)一段時(shí)間且不會(huì)復(fù)制,也可以穩(wěn)定地整合至受體基因組內(nèi),隨著宿主基因組的復(fù)制而復(fù)制,各種基因輸送系統(tǒng)采用的術(shù)語(yǔ)與該領(lǐng)域的技術(shù)進(jìn)展步調(diào)一致,并進(jìn)一步區(qū)分不同的方法和細(xì)胞類型。轉(zhuǎn)染技術(shù)作為一種分析工具，可將外源基因?qū)胝婧思?xì)胞，有助于機(jī)體表征遺傳、蛋白質(zhì)合成、細(xì)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中，其應(yīng)用越來越廣泛。影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些？1.轉(zhuǎn)染試劑的選擇不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn)，通過這些資料可選...

核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗(yàn)的基礎(chǔ)，核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的最重要因素，也是下游分子生物學(xué)試驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。核酸純化的方法及原理如下：一、PC抽提法PC抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段，但超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)不會(huì)被一次去除，必須靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都會(huì)損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質(zhì)難以*去除，以及基因組DNA會(huì)斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個(gè)用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA的特點(diǎn)，在RNA抽提...

在常溫下由化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光，產(chǎn)生電子能級(jí)處于激發(fā)態(tài)的物質(zhì)，后者通過躍遷釋放能量產(chǎn)生光子，從而導(dǎo)至的發(fā)光現(xiàn)象。化學(xué)發(fā)光是一個(gè)多步驟的過程。學(xué)發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)誕生于1977年，是近十年來在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析，將高靈敏的化學(xué)發(fā)光技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)結(jié)合起來建立的微量測(cè)定技術(shù)，因此該技術(shù)靈敏度高、線性范圍寬、應(yīng)用范圍廣。而且CLIA與放射免疫分析(RIA)、熒光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(...

PCR的原理：多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction)簡(jiǎn)稱PCR技術(shù)，是近30多年發(fā)展起來的一種體外擴(kuò)增特異性DNA片段的技術(shù)，可在數(shù)小時(shí)之內(nèi)對(duì)僅有幾個(gè)拷貝的基因放大千萬(wàn)倍。那么，PCR的原理是怎樣的呢？PCR技術(shù)實(shí)際上是在模板DNA、引物以及原料(四種脫氧核糖核苷酸)在適宜的反應(yīng)條件下，通過DNA聚合酶的酶促反應(yīng)完成DNA擴(kuò)增的過程。PCR技術(shù)的特異性取決于引物和模板DNA結(jié)合的特異性。PCR反應(yīng)分為三步：1)變性：通過加熱時(shí)DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，...

腸激酶(Enterokinase，EK，EC3.4.21.9)是一種異源二聚體形式存在于哺乳動(dòng)物十二指腸內(nèi)的絲氨酸蛋白酶。它能高效專一性的水解工程菌表達(dá)的融合蛋白（識(shí)別位點(diǎn)是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）釋放出目的蛋白，被廣泛用于生物工程制藥的開發(fā)。牛腸激酶由一條結(jié)構(gòu)亞基（重鏈）和一條催化亞基（輕鏈）構(gòu)成，二者以二硫鍵結(jié)合。據(jù)報(bào)道，重組腸激酶輕鏈體外具有全酶的酶切特異性，同時(shí)對(duì)基因工程融合蛋白底物的酶切活性較提純的牛腸激酶明顯增強(qiáng)。天然腸激酶來源有限，且從動(dòng)物組織提...