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影響細胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些?

更新時間:2022-08-19      點擊次數(shù):854
  細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學試驗中,其應用越來越廣泛。
  影響細胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些?
  1.轉(zhuǎn)染試劑的選擇
  不同細胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同,但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要,因此在轉(zhuǎn)染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。
  每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細胞株列表和文獻,通過這些資料可選擇適合實驗設計的轉(zhuǎn)染試劑。當然,適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉(zhuǎn)染試劑。
  2.細胞狀態(tài)
  一般低的細胞代數(shù)(<50)能確保基因型不變。適合轉(zhuǎn)染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到指數(shù)生長期的細胞,細胞生長旺盛,最容易轉(zhuǎn)染。
  細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,總染色體重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會導致和轉(zhuǎn)染相關的細胞行為的變化。也就是說同一種系的細胞株,在各實驗室不同培養(yǎng)條件下,其生物學性狀發(fā)生不同程度的改變,導致其轉(zhuǎn)染特性也發(fā)生變化。
  因此,如果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率降低,可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復結果。
  3.轉(zhuǎn)染方法
  轉(zhuǎn)染時應根據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法進行,但也要根據(jù)實驗室的條件來確定轉(zhuǎn)染條件。
  (1)細胞培養(yǎng)物
  推薦在轉(zhuǎn)染前24小時分細胞,這將提供正常細胞代謝,增加對外源DNA攝入的可能。一定要避免細菌,支原體或真菌的污染。
  (2)細胞密度
  細胞密度對轉(zhuǎn)染效率有一定的影響。如果選用新的細胞系或者新的轉(zhuǎn)染試劑,最好能夠進行優(yōu)化實驗并為以后的實驗建立一個穩(wěn)定方法,包括適當?shù)慕臃N量和培養(yǎng)時間等等。
 ?。?)血清
  對于主流的轉(zhuǎn)染試劑來說,血清的存在不會影響轉(zhuǎn)染效率,甚至還有助于提高轉(zhuǎn)染效率。
  不過要特別注意:對于RNA轉(zhuǎn)染,如何消除血清中潛在的RNase污染是值得關注的。
  胎牛血清經(jīng)常用到,便宜一點的有馬或牛血清。通常的,血清是一種包含生長因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物,對不同細胞的生長作用有很大的差別。血清質(zhì)量的變化直接影響細胞生長,因此也會影響轉(zhuǎn)染效率。新加培養(yǎng)基的預熱對細胞轉(zhuǎn)染很有幫助。
  (4)氮磷(N/P)比
  N/P比是轉(zhuǎn)染效率的關鍵(為了換算方便,一般以DNA/轉(zhuǎn)染試劑質(zhì)量比表示),在一定比例范圍內(nèi)轉(zhuǎn)染效率隨N/P比成比例增高,之后達到平值,但毒性也隨之而增加,因此在實驗之前應根據(jù)推薦比例,確定本實驗的最佳轉(zhuǎn)染比例。
  (5)DNA質(zhì)量
  DNA質(zhì)量對轉(zhuǎn)染效率影響非常大。應盡可能提高DNA的純度。
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